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免疫親和柱在怎樣的條件下才能洗脫抗原？

更新日期：2022-07-05 信息來(lái)源：本站瀏覽次數(shù)：2155

　　免疫親和柱測(cè)定的基礎(chǔ)是抗原抗體反應(yīng)，抗體連接在柱體內(nèi)，樣品經(jīng)過(guò)提取、稀釋，在毒素與抗體結(jié)合，之后洗滌親和柱除去沒(méi)有被結(jié)合的其他無(wú)關(guān)物質(zhì)。用洗脫液洗脫毒素，然后注入到分析儀器中用于檢測(cè)。

　　免疫親和柱在標(biāo)準(zhǔn)的洗脫條件下很難洗脫的抗原一般是由多種化學(xué)鍵連接的。將幾種洗脫條件結(jié)合使用可以有效克服這些問(wèn)題。

　　如果抗原不能用簡(jiǎn)單的條件洗脫，更換抗體可能比試用各種條件要容易些。

　　一般使用過(guò)的層析柱比新柱洗脫更容易，所以新柱洗脫一般需要較苛刻的條件才能洗脫抗原。

　　試用梯度洗脫方法，使抗原的洗脫峰清晰而陡峭。

　　避免使用二硫蘇糖醇和其他還原劑，因其能破壞抗體重鏈和輕鏈間的鏈間二硫鍵。

　　值得注意的是當(dāng)測(cè)試不同的洗脫條件時(shí)，有些緩沖液雖然不能洗脫抗原，但在其他條件改變后仍可能是有效的洗脫緩沖液。

　　實(shí)際上有些非洗脫緩沖液，可能改變抗原抗體反應(yīng)的平衡。例如高鹽條件具有疏水作用。應(yīng)用這些條件可以比較容易地收集抗體基質(zhì)上的抗原。

免疫親和柱

　　免疫親和柱的檢測(cè)方法：

　　霉菌毒素測(cè)定的主要方法有薄層色譜，高效液相色譜，熒光光度和酶聯(lián)免疫吸附等方法。這些方法的實(shí)驗(yàn)原理和操作過(guò)程各不相同，對(duì)實(shí)驗(yàn)結(jié)果的準(zhǔn)確性和靈敏性造成影響的因素也是多種多樣。這其中有一點(diǎn)是共同的也是重要的影響因素，那就是檢測(cè)樣品的純度。高純度的樣品雜質(zhì)含量很低，減少了實(shí)驗(yàn)過(guò)程中的干擾因素，從而提高了實(shí)驗(yàn)結(jié)果的可靠性和穩(wěn)定性。因此，選擇合適的提取純化方法對(duì)霉菌毒素檢測(cè)至關(guān)重要。

　　傳統(tǒng)的霉菌毒素提純方法多采用有機(jī)溶劑萃取和化學(xué)吸附等方法，這些方法存在諸多不足之處：

　　1、特異性不高，純化效率低，純化效果差。

　　2、實(shí)驗(yàn)靈敏度和重復(fù)性差。

　　3、操作過(guò)程煩瑣、復(fù)雜、時(shí)間長(zhǎng)，勞動(dòng)強(qiáng)度大。

　　4、使用有機(jī)溶劑容易造成環(huán)境污染，對(duì)操作人員傷害較大。

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